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江西蛋白纯化生产厂家

发布时间:2023-06-05 01:48:23
江西蛋白纯化生产厂家

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GST标签蛋白纯化亲和层析介质:谷胱甘肽配基是通过12个原子连接臂偶联到4%的高流速琼脂糖层析介质上,这种偶联使得介质对GST-tag融合蛋白和其他谷胱甘肽结合蛋白有更强的结合能力,介质的高蛋白载量和良好的流速性能使大规模生产简单直接。

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亲和层析捕获后,进一步用强阳离子交换层析SP Seplife Large Scale层析介质继续纯化捕获的单抗,进一步去除少量的HCP,HCD及第1步亲和层析捕获时rProtein A亲和介质脱离的亲和配基rProtein A。强阳离子交换层析后,通过调pH的方式用pH3.7-3.8的环境进行病毒灭活。低pH病毒灭活后,在通过阴离子交换层析Q Seplife Large Scale流穿模式,让单抗流穿,层析介质吸附痕量的杂质进一步纯化。

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疏水作用层析(Hydrophobic Interaction Chromatography,HIC)是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。由于蛋白质空间结构受到不同缓冲液环境的影响,而发生立体结构发生改变。疏水层析填料利用这种结构的改变,在含盐的水溶液体系中,借助于层析填料与蛋白质分子之间的疏水作用达到吸附活性蛋白分子的目的,这种层析技术称为疏水作用层析。

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同时半胱氨酸(Cys)的残基上的巯基,色氨酸(Trp)的残基上的吲哚基也可以Ni2+,Co2+等过渡金属离子形成配位键而选择性的结合在金属螯合介质上。金属螯合亲和层析介质:1、Ni Seplife FF(IDA);2、Ni Seplife 6FF(NTA);3、Ni Seplife FF(TED);4、Ni Seplife HP(IDA);5、IMAC Seplife FF(IDA)。

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His-Tag融合蛋白纯化常见问题:1.His标签蛋白不和介质结合。a可能原因:超声功率不合适(太大,蛋白碳化,太小,蛋白没完全释放)。解决方法:改变超声功率或者其它方法破碎细胞。b.样品或缓冲液不合适。解决方法:确保缓冲液中螯合剂,还原剂,咪唑浓度不是很高。c.His标签暴露不完全。解决方法:在缓冲液中加变性剂(4-8M尿素,4-6M盐酸胍),然后用IMAC介质纯化。d.His标签丢失。

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生物分子与亲和层析介质上的配体通过共价键、范德华力、疏水力、静电力等作用发生生物学专一性结合形成复合物,共价链接在载体表面的功能团配体上。蛋白质亲和层析技术通过目标蛋白质与配体间通过特异性亲和力吸附而达到分离纯化的目的,具有生物专一性的特点,纯化效率高。亲和层析是一种根据生物分子之间的特异相互作用来分离蛋白的层析方法,如酶和底物、受体和配体、抗体和抗原。这种作用是特异性的也是可逆的,通过这种可逆的结合和分离来达到蛋白纯化的目的。