浙江层析介质厂家供应

His-Tag融合蛋白纯化常见问题：1.His标签蛋白不和介质结合。a可能原因：超声功率不合适（太大，蛋白碳化，太小，蛋白没完全释放)。解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。b.样品或缓冲液不合适。解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。c.His标签暴露不完全。解决方法：在缓冲液中加变性剂（4-8M尿素，4-6M盐酸胍），然后用IMAC介质纯化。d.His标签丢失。

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层析体系需要优化，缓冲体系的pH要在7.5-8.3之间，添加200-500mM氯化钠减少非特异性吸附，上样完后要彻底清洗，保证层析填料孔内，颗粒间未结合的蛋白全部洗出后，在开始洗脱，保证上完样后，清洗在10CV以上。洗脱过程需要摸索咪唑的强度梯度，用连续咪唑梯度来摸索洗脱浓度。

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蛋白质的水化膜遭到破坏或者中和了表面的净电荷后形成的沉淀往往是可逆的，这在蛋白盐析,蛋白等电沉淀中最为常见,利用这一特性也常用来分离纯化蛋白。这也可以理解为蛋白分子的物理状态发生了变化，这种聚集沉淀是可逆的。蛋白分子在遭到剧烈的物理化学(如高温,极端pH等)作用时，分子中的次级键遭到破坏断裂，导致空间构象从紧密有序的变为松散无序的状态,这种清况下形成的沉淀是不可逆的，蛋白发生不可逆变性。这种沉淀也可以理解为蛋白分子发生了化学本质的变化。

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Seplife®IEX离子交换层析填料是采用独有的聚合物合成技术制备出以聚甲基丙烯酸酯为骨架的微球。该聚合物微球经过表面亲水性改造以增加亲水性，再通过化学合成的方法键合不同的离子交换基团。由于其良好的亲水性和较好的物理、化学稳定性及刚性结构，使得离子交换层析填料具有良好的生物相溶性及使用寿命，并提高纯化效率。

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样品的认知：在层析过程要对样品做足够的认知，包括样品的浓度，样品的组成等做一定的了解，如真核细胞分泌表达的样品，要了解其上游工艺，培养基组成，培养过程等的一些添加剂是否对层析填料的性能及寿命衰减会有影响，及样品的酸碱度，离子强度，浊度等做足够的了解，必要的时候要进行再次澄清处理及体系置换。

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样品的组份应满足层析工艺且对层析填料的性能没有影响，必要时可以用蓝晓科技的凝胶过滤介质Seplife G-25 M介质对样品进行置换体系处理。