疏水层析
是根据不同的蛋白与疏水表面产生的相互作用的差异,进行蛋白分离的一种方法。一般而言,离子强度(盐浓度)越高,物质所形成的疏水键越强。
常用的疏水填料有两种类型:Butyl, Phenyl分别为在seplife 6FF基球上通过一个短接头,共价键合丁基,苯基的层析填料。结构见下图:
疏水介质特点
◆高盐浓度的样品不必做预处理就可以直接上样
◆溶解在7M盐酸胍中的蛋白质包涵体可以直接上样,一次层析分离就可以实现除去盐酸胍、蛋白复性和分离三个目的,而且复
◆性效果常常好于其他方法
疏水层析基本操作
1、层析柱的选择
柱床高度通常为5-15cm,规模放大时,可保持柱高不变,增加柱子的直径。
2、缓冲条件的选择
3、缓冲液的选择
◆随着pH的升高,疏水作用相应下降
◆由于pH升高时,被中和的带点基团增加,从而导致蛋白质的亲水性增加
◆在中性pH条件下与疏水相互作用介质不结合的蛋白质,在酸性pH条件下则能够结合
4、蛋白质的洗脱
◆低浓度的水溶性乙醇、去污剂和具有盐溶作用的盐破坏水的结构、降低表面张力,从而削弱疏水相互作用。
◆乙醇或去污剂的非极性区与结合的蛋白质竞争疏水性配基,从而将蛋白质替代下来
5、柱子的再生、清洁和储存
◆轻度污染时,蒸馏水洗涤
◆污染物紧密结合时,6 mol/L尿素或6 mol/L盐酸胍洗涤+起始缓冲液或贮存缓冲液洗涤
◆NaOH可用于溶解变性和沉淀的蛋白质及脂类
◆未使用的介质储存在封闭的容器中,在4-25℃的条件下保存
◆用过的介质应贮存在含有适当抑菌剂的溶液中,在4 ~ 8℃的条件下保存,不得冷冻
产品技术参数
压力曲线
色谱柱:XK16*20
流动相:0.1mol/L Nacl
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