减毒流感病毒载体疫苗下游工艺解决方案

用苏州蓝晓生物科技的Seplife® LX-MC-dex1微载体培养MDCK细胞。微载体培养是目前公认最具发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，且容易放大。蓝晓科技的微载体广泛应用在疫苗、单抗、基因治疗病毒载体等生物制品的大规模生产中，蓝晓科技自主研发的Seplife® LX-MC-dex1细胞培养微载体几乎适合所有贴壁细胞（如Vero、CHO、293T及MDCK等），细胞可贴附微球 2D 表面生长，1g的Seplife® LX-MC-dex1微载体提供 4400 cm2的表面积给细胞贴附。

图1：Seplife® LX-MC-dex1细胞培养微载体培养效果（来源：蓝晓科技）

02、固液分离

细胞培养后，先经过离心的方式固液分离去除培养基中水及培养基组分中的物质；

03、细胞洗涤

固液分离后收集细胞，可以用生理盐水重悬细胞，对细胞进行洗涤（工业上此工序可省略），保持细胞破碎时破碎的是纯净的细胞；

04、细胞重悬

细胞洗涤后，重悬细胞，重悬细胞要注意重悬缓冲液的种类及和重悬后的细胞浓度，浓度影响后面破碎效率，缓冲液影响后续纯化过程，尽量保持和下游工艺的合理衔接，避免置换缓冲液；

05、细胞破碎

重悬后可以用去污剂Tween20.Tween80.Triton X-100等破碎细胞，或者通过冻融的方式破碎细胞，破碎后可以测定病毒滴度，保证病毒全部释放出来；

06、破碎液固液分离

破碎后再次离心固液分离，收集上清；

07、澄清

上清液在用微滤（GF）的方式进行澄清处理（要特别注意澄清度，澄清度是影响后续层析填料及超滤（UF)膜组件使用寿命的关键因素之一），澄清度可以通过测浊度的方式检测；

08、核酸酶处理

澄清后加入核酸酶处理，降解核酸降低粘度，考虑核酸酶活加入的量及酶处理时间，核酸酶处理时要缓慢搅拌，保证处理的均匀性；

09、缓冲液置换

用超滤膜组件进行缓冲液置换，保证缓冲体系适合下一步层析过程，同时置换时也可以适当浓缩，注意超滤时的跨膜压及超滤时剪切力对病毒完整性的影响；若8工序后的样品不影响粗纯的层析过程（需要从细胞重悬工序开始合理选择缓冲液，及破碎方式的选择考虑）此工序可省去；

10、粗纯

减毒流感病毒载体新冠疫苗可用阴离子交换层析吸附——洗脱模式(大多数病毒在中性pH环境中都带负电荷）进行粗纯及浓缩，推荐使用苏州蓝晓生物高刚性琼脂糖微球阴离子交换填（Seplife large scale Q )，离子交换层析的过程，病毒被吸附在填料上，吸附的过程也会把病毒浓缩在填料上，苏州蓝晓生物的Seplife large scale Q填料吸附减毒流感病毒载体的载量在1-3mg/ml(与工艺缓冲液，层析时保留时间等有关），用阴离子交换层析吸附——洗脱模式粗纯减毒流感病毒载体新冠疫苗时，可以运用DOE，系统的表征各个层析工艺参数，达到最优的纯化结果（回收率和纯度），减轻后续精纯工序的压力；

同时也可以用苏州蓝晓生物的混合模式层析介质Seplife® Suncore 700来粗纯，病毒颗粒被排阻在惰性层外流穿，HCP,HCD,内毒素等杂质进入活性区域和介质以静电力，疏水作用力结合，从而实现分离。

苏州蓝晓生物科技有限公司

细胞培养微载体

Seplife® LX-MC-dex1

高刚性琼脂糖微球阴离子交换介质

Seplife large scale Q

高刚性高分辨率琼脂糖微球阴离子交换介质

Seplife large scale Q HP

多模式复合型层析填料

Seplife® Suncore 700

凝胶过滤层析填料

Seplife 4FF

苏州蓝晓生物科技有限公司，生物制药下游工艺解决方案专业供应商！