rProtein A Seplife Suni是蓝晓科技应对抗体客户需求推出的Protein A亲和层析填料,以球形,高交联琼脂糖凝胶为基质,通过自主创新技术将耐碱性重组蛋白A键合到该基质上。可以特异性地与抗体的Fc区结合,用于抗体(单抗和多抗)的分离纯化,只需一步亲和层析,即可从腹水、血清或培养液等样品中得到高纯度的抗体。
产品技术参数
产品名称 | rProtein A Seplife Suni |
外观 | 球状凝胶,无臭无味 |
基质 | 高交联琼脂糖微球 |
配基 | 耐碱重组Protein A |
流速(cm/h) | >300cm/h(0.1MPa) |
耐压(MPa) | 0.3MPa |
粒径D50(μm) | 90m |
载量 | 50mg/ml |
配基密度 | 5~6mg/ml |
耐碱性 | 0.1-0.5M NaOH |
载量和驻留时间关系
压力流速曲线
备注:层析柱规格:16mm×400mm
耐碱测试
层析柱测试完DBC(10%流穿)后,用0.5M NaOH洗脱15min,室温下放置24h,然后测试DBC变化。
填料名称 | 泡碱前DBC(mg/ml) | 泡碱后DBC(mg/ml) | 下降百分比% |
国外品牌 | 40.51 | 31.59 | 22.1 |
rProtein A Seplife Suni | 49.10 | 39.38 | 19.8 |
抗体纯化应用
某抗体发酵液纯化过程,从载量,纯度,收率,洗脱体积等方面平行对比国外品牌LX,结果表明各方面数据与参比填料接近。
实验条件:
仪器 | AKTA Pure 150 |
层析柱 | r-ProteinA Seplife Suni(Hitrap 1ml预装柱) |
预平衡 | 20mM PB+150mM NaCl,pH7.4 |
淋洗 | 20mM PB+150mM NaCl,pH7.4 |
洗脱 | 100mM柠檬酸钠,pH3.0 |
CIP | 0.5M NaOH |
实验结果:
填料名称 | 载量(mg/ml) | SEC纯度(%) | 收率(%) |
国外品牌LX | 46.8 | 95.6 | 98.2 |
rProtein A Seplife Suni | 45.5 | 95.9 | 99.1 |
使用方法
3.1 装柱
装柱按照标准操作规程操作,必须保证每种材料都处于工作温度。r-ProteinA Seplife Suni填料可使用常规琼脂糖软胶装柱方法。
3.2平衡
用3-5CV预平衡液平衡层析柱,直至pH和电导率保持不变。
3.3上样
样品的预处理:样品离心后,用0.45μm滤膜过滤,然后上样,以免堵塞层析柱。上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,一般可通过测试该样品在层析柱上的DBC作为参考。
3.4洗脱
一般利用低pH缓冲液进行洗脱,选择pH3.0-3.5的缓冲液:如0.1mol/L甘氨酸-HCl,pH3.0,实际洗脱条件可优化。洗脱后,应立刻中和缓冲液,将收集到的抗体溶液中和至中性(pH7.4左右),以维持抗体的生物活性,一般中和液为1mol/L Tris-HCl,pH9-10。
3.5清洗
CIP方法:
r-ProteinA Seplife Suni是一种耐碱亲和介质,可以耐受 0.1M-0.5M NaOH溶液的清洗,一般使用大于3CV的 0.1–0.5 M NaOH,接触时间为15 min;然后用5CV的平衡液冲洗至中性。
注:由于发酵液纯化过程会引入部分杂质吸附在层析柱上,造成压力升高,在做CIP时,可考虑一定次数后进行up flow。
3.6存储
密封保存在4~8℃(保存溶液为20%乙醇)干燥、通风、清洁处,不可冷冻;用过的柱子保存在4~8℃,20%乙醇溶液中。
3.7运输
运输中避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。
4.注意事项
(1)该介质从冷室或冰箱中取出后最好在室温下恢复到室温,然后缓慢摇匀后装柱,以免产生气泡影响柱效;
(2)一般Protein A亲和层析填料装柱高度15-25cm,根据实际情况做合理的高度选择;
(3)发酵液上样前做好澄清过滤操作,以防堵塞层析柱;
(4)凝胶用低pH缓冲液洗脱的时间应尽可能短,洗脱后用中性缓冲液尽快洗到pH中性,以延长介质的使用寿命。
产品牌号 | 货号 | 包装规格 |
rProtein A Seplife Suni | A4073101 | 5ml |
A4073102 | 25ml | |
A4073103 | 100ml | |
A4073104 | 500ml | |
A4073105 | 1L | |
A4073106 | 5L | |
A4073107 | 10L |
生产日期:见标签
使用期限:在适当的贮藏条件下可贮藏5年
注册人名称/生产企业:西安蓝晓科技新材料股份有限公司
注册人住址/生产地址:西安市高新开发区锦业路135号蓝晓科技园
售后服务单位:西安蓝晓科技新材料股份有限公司
邮政编码:710076
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官方网站:www.sunresin.com
注册人名称/销售企业:苏州蓝晓生物科技有限公司
注册人地址/销售地址:苏州市区工业园区裕新路108号5楼525室
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