Ni Seplife FF(TED)是蓝晓科技自主研发的一种新型亲和层析介质,其利用样品组分中的组氨酸与金属离子的亲和吸附进行分离纯化。镍螯合高流速琼脂糖层析介质(TED)特异性好,流速快,螯合金属离子更稳定不易脱落,可以在含有EDTA及DTT的情况下进行目的蛋白高效的纯化,批次重复性好,颗粒粒度均匀。可用于分离纯化能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His 标签的重组蛋白。
产品牌号 | Ni Seplife FF(TED) |
外观 | 球状凝胶,无臭无味 |
基质 | Seplife 6FF |
形状 | 球形 |
最高流速(cm/h) | ≧370 |
耐压(MPa) | 0.3 |
粒径(μm) | 45~165 |
离子结合量 | (Ni2+ umol/ml):~25 |
pH稳定性 | 3~13(长期);2~14(短期,在位清洗[CIP]) |
化学稳定性 | 在常用水相溶液中稳定:0.01M NaOH;0.01M HCl;6M盐酸胍(24h),1M NaOH(24h),10mm EDTA(24h),100mmEDTA(2h),5mm DTT(24h) |
应用 | 适用His 标签的重组蛋白纯化 |
使用方法
3.1 装柱
装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度,凝胶装柱前需要脱气。
3.2平衡
用2~5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡,直至电导率、pH值等参数不变。
3.3上样
(1)样品一般溶解于pH6~8的初始缓冲液中,提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。
(2)常用缓冲液有10~100mmol/L磷酸钠缓冲液、20~200mmol/LTris-HCl缓冲液等。
(3)缓冲液中一般要加入0.15~0.5mol/L的NaCl以消除离子交换作用。
(4)初次使用镍螯合琼脂糖凝胶时,推荐使用50mmol/L PBS(50 mmol/L NaH2PO4,0.5 mol/L NaCl,pH 7.4)作为初始缓冲液。
3.4洗脱
洗脱一般分为以下几种方法:
(1)降低pH洗脱:大多数蛋白在pH 6~4会被洗脱下来(也可以在pH 3~4),缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
(2)竞争性洗脱:线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度(如0~0.5mol/L咪唑、0~50 mmol/L组氨酸、0~2mol/L NH4Cl)。
(3)螯合剂洗脱:EDTA、EGTA 等螯合剂可同金属离子产生作用力会使蛋白被洗脱下来。但是此法不能分离不同的蛋白,会影响蛋白的吸附,导致融合蛋白无法挂柱。
备注:(1)初次使用时,如不确定洗脱需要的咪唑浓度,推荐在初始缓冲液中分别加入10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/L咪唑,浓度从低到高分别洗脱和收集重组蛋白,之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
(2)咪唑为碱性,相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。
(3)降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使金属离子脱落,下次使用前需重新螯和金属离子。
(4)有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。
上述洗脱方法,均须在缓冲液中加入150~500mmol/L的NaCl以消除离子交换作用。
3.5 再生
(1)多次使用的柱子无需脱镍,可以直接用NaOH清洗。清洗方法:用0.1~1.0 mol/L NaOH反向清洗柱子,50 cm/h保持1~2 h,不仅可以去除结合强的杂质,也可以去除热源。
(2)需要更换螯合的金属离子时,必须将凝胶脱镍再生。脱镍方法:首先用5~10个柱床体积的蒸馏水淋洗柱子,然后用5~10个柱床体积的0.1mol/L HCl淋洗柱子,最后用2~3个柱床体积的0.5mol/L NaCl洗至中性,最后用超纯水洗至pH和电导不变。
(3)清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法:首先用2~5个柱床体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子,然后用0.1~0.3mol/L金属盐溶液过柱5~10个柱床体积以螯合金属离子,最后用5~10个柱床体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。
3.6在位清洗
(1)去除因离子交换作用吸附的蛋白:用2mol/L NaCl溶液反向清洗2~3个柱床体积。
(2)去除强疏水性蛋白和脂质等:用70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗4个柱床体积。
(3)除去沉淀蛋白、疏水性蛋白:参照凝胶再生步骤。
3.7存储
密封保存在4~30℃(保存溶液为20%乙醇)干燥、通风、清洁处,不可冷冻;用过的柱子保存在4~8℃,20%乙醇溶液中。
3.8运输
运输中避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。
4.注意事项
(1)样品与Ni Seplife FF(TED)必须用洗脱缓冲液彻底平衡后,才能进行柱层析。
(2)所装的柱床必须表面平整,无沟流及气泡,否则应重装。
(3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。
(4)洗脱过程中应严格控制流速,且勿过快。
(5)加样及整个洗脱过程中,严防柱面变干。
产品牌号 | 货号 | 包装规格 |
Ni Seplife FF(TED) | A4153202 | 25ml |
A4153203 | 100ml | |
A4153204 | 500ml | |
A4153205 | 1L | |
A4153206 | 5L | |
A4153207 | 10L |
生产日期:见标签
使用期限:在适当的贮藏条件下可贮藏5年
注册人名称/生产企业:西安蓝晓科技新材料股份有限公司
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售后服务单位:西安蓝晓科技新材料股份有限公司
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