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Ni Seplife FF(IDA)

基本信息

Ni Seplife FF(IDA)层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型亲和层析介质,具有良好的化学稳定性和生物相容性,是将亚氨基二乙酸基键合在高流速琼脂糖凝胶过滤层析介质上,再螯合金属离子Ni2+形成的一种亲和层析介质。Ni Seplife FF(IDA)利用样品组分中的组氨酸与金属离子的亲和吸附进行分离纯化,可用于分离纯化能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His 标签的重组蛋白。
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Ni Seplife  FF(IDA)层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型亲和层析介质,具有良好的化学稳定性和生物相容性,是将亚氨基二乙酸基键合在高流速琼脂糖凝胶过滤层析介质上,再螯合金属离子Ni2+形成的一种亲和层析介质。Ni Seplife  FF(IDA)利用样品组分中的组氨酸与金属离子的亲和吸附进行分离纯化,可用于分离纯化能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His 标签的重组蛋白。


产品牌号

Ni Seplife  FF(IDA)

外观

球状凝胶,无臭无味

基质

Seplife 6FF

形状

球形

最高流速(cm/h)

≧370

耐压(MPa)

0.3

粒径(μm)

45~165

离子结合量

(Ni2+ umol/ml):~30

pH稳定性

3~13(长期);2~14(短期,在位清洗[CIP])

化学稳定性

在常用水相溶液中稳定:0.1M氢氧化钠;8M尿素(24h);6M盐酸胍(24h),1M NaOH(24h),5mm DTT(24h)

应用

适用His 标签的重组蛋白纯化


使用方法

3.1 装柱

装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度,凝胶装柱前需要脱气。

3.2平衡

用2~5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡,直至电导率、pH值等参数不变。

3.3上样

(1)样品一般溶解于pH6~8的初始缓冲液中,提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。

(2)缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐,同时最好避免巯基乙醇、DTT等还原剂。

(3)常用缓冲液有10~100mmol/L磷酸钠缓冲液、20~200mmol/LTris-HCl缓冲液等。

(4)缓冲液中一般要加入0.15~0.5mol/L的NaCl以消除离子交换作用。

(5)初次使用镍螯合琼脂糖凝胶时,推荐使用50mmol/L PBS(50 mmol/L NaH2PO4,0.5 mol/L NaCl,pH 7.4)作为初始缓冲液。

3.4洗脱

洗脱一般分为以下几种方法:

(1)降低pH洗脱:大多数蛋白在pH 6~4会被洗脱下来(也可以在pH 3~4),缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。

(2)竞争性洗脱:线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度(如0~0.5mol/L咪唑、0~50 mmol/L组氨酸、0~2mol/L NH4Cl)。

(3)螯合剂洗脱:EDTA、EGTA 等螯合剂可同金属离子产生作用力会使蛋白被洗脱下来。但是此法不能分离不同的蛋白,会影响蛋白的吸附,导致融合蛋白无法挂柱。

备注:(1)初次使用时,如不确定洗脱需要的咪唑浓度,推荐在初始缓冲液中分别加入10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/L咪唑,浓度从低到高分别洗脱和收集重组蛋白,之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。

(2)咪唑为碱性,相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。

(3)降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使金属离子脱落,下次使用前需重新螯和金属离子。

(4)有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。

上述洗脱方法,均须在缓冲液中加入150~500mmol/L的NaCl以消除离子交换作用。

3.5 再生

(1)多次使用后或需要更换螯合的金属离子时,必须将凝胶脱镍再生。脱镍方法:首先用5~10个柱床体积的蒸馏水淋洗柱子,然后用5~10个柱床体积的100mmol/L EDTA淋洗柱子,最后用2~3个柱床体积的0.5mol/L NaCl洗掉残留的EDTA。

(2)多次使用的柱子脱镍后一般需要清洗。清洗方法:用0.1~1.0 mol/L NaOH反向清洗柱子,50 cm/h保持1~2 h,不仅可以去除结合强的杂质,也可以去除热源。

(3)清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法:首先用2~5个柱床体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子,然后用0.1~0.3mol/L金属盐溶液过柱5~10个柱床体积以螯合金属离子,最后用5~10个柱床体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。

3.6在位清洗

(1)去除因离子交换作用吸附的蛋白:用2mol/L NaCl溶液反向清洗2~3个柱床体积。

(2)去除强疏水性蛋白和脂质等:用70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗4个柱床体积。

(3)除去沉淀蛋白、疏水性蛋白:参照凝胶再生步骤。

3.7存储

密封保存在4~30℃(保存溶液为20%乙醇)干燥、通风、清洁处,不可冷冻;用过的柱子保存在4~8℃,20%乙醇溶液中。

3.8运输

运输中避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。

注意事项

(1)样品与Ni Seplife  FF(IDA)必须用洗脱缓冲液彻底平衡后,才能进行柱层析。 

(2)所装的柱床必须表面平整,无沟流及气泡,否则应重装。

(3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。

(4)洗脱过程中应严格控制流速,且勿过快。

(5)加样及整个洗脱过程中,严防柱面变干。


产品牌号

货号

包装规格

Ni Seplife  FF(IDA)

A4013202

25ml

A4013203

100ml

A4013204

500ml

A4013205

1L

A4013206

5L

A4013207

10L

生产日期:见标签

使用期限:在适当的贮藏条件下可贮藏5年

注册人名称/生产企业:西安蓝晓科技新材料股份有限公司

注册人住址/生产地址:西安市高新开发区锦业路135号蓝晓科技园

售后服务单位:西安蓝晓科技新材料股份有限公司

邮政编码:710076

联系电话:86-29-8110 4050

传真:029-8669 1600-8254

官方网站:www.sunresin.com

注册人名称/销售企业:苏州蓝晓生物科技有限公司

注册人地址/销售地址:苏州市区工业园区裕新路108号5楼525室

联系电话:0512-65160522



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