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连云港Seplife® LXPM SP 5504M

基本信息

Seplife® LXPM SP 5504M层析介质是以聚丙烯酸酯为基质,在表面进行了亲水性改性再键合了强酸性离子交换基团,具有载量高、化学稳定性好、机械强度大、非特异性吸附小等特点,具有卓越的生物相容性和柱床稳定性,可以提供更快的流速,特别适合大规模制备的应用,显著提高了下游纯化工艺的生产效率,可以降低成本……
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Seplife® LXPM SP 5504M层析介质是以聚丙烯酸酯为基质,在表面进行了亲水性改性再键合了强酸性离子交换基团,具有载量高、化学稳定性好、机械强度大、非特异性吸附小等特点,具有卓越的生物相容性和柱床稳定性,可以提供更快的流速,特别适合大规模制备的应用,显著提高了下游纯化工艺的生产效率,可以降低成本,创造出较好的经济效益,广泛应用于抗体、蛋白质、多肽、核酸(寡核苷酸)、病毒,胰岛素等生物分子的捕获、中度纯化、精细纯化。

骨架

聚甲基丙烯酸甲酯

外观

白色不透明球状颗粒

功能基团

-O-R-O-(CH2)3-SO3-

交换容量(mmol/mL)

0.13-0.17

平均粒径(μm)

80

孔径(Å)

1000

载量(mg/ml,Lysozyme

≧110

耐压流速(cm/h)

300-1000,22mm×20cm,3bar

压缩因子

≦1.05

耐压(Mpa)

0.8

存储 防腐剂

20%乙醇溶液,150mol/l NaCl

再生

0.5-2M NaCl溶液

清洗

0.1-0.5M NaOH溶液(或者50%乙醇)

稳定性耐酸、耐碱、不溶于甲醇、乙醇、甲苯、DMSO、DMF、正庚烷等有机溶剂。


使用方法

3.1 装柱

匀浆浓度等于静置胶体积除以除以匀浆后的总体积。采用0.5M NaCl匀浆可获得最佳装柱效果,其浓度为60%-70%。方法如下:

1)色谱柱的柱体积 V,V=Ac×L,Ac=π×r2。

Ac:色谱柱横截面积;L:色谱柱高度;r:色谱柱半径。

2) 搅动介质形成匀浆液,量取所需质量或体积。其为柱体积的1.2倍左右,防止收缩。

3)用 0.5 M NaCl 溶液置换20%乙醇,平衡过夜。

4)装柱之前,用 0.5 M NaCl 溶液调整匀浆浓度为 65 ~ 70%;将匀浆一次性倒入层析柱,沉降平衡后标注高度。

5)将分配器装入,调节高度使得压缩系数为 1.05 ~ 1.10;然后启动输液泵,用 1.5~2 倍工作流速使柱床稳定。

6)按照 SOP 进行柱效和对称性的测定,须达到预定标准。 

3.2 柱效评价 

装好之后,色谱柱用3-5体积超纯水清洗。100cm/h流速平衡并进行柱效测试。

离子交换层析柱的柱效测试方法

样品:      2 M NaCl 溶液 

上样量:    1~5 % 柱体积 

洗脱液:    0.5 M NaCl 溶液 

线性流速:  100 cm/h 

检测:      UV @ 280 nm ,2 M NaCl 上样:电导检测仪

3.3 清洗 

装好的色谱柱应使用至少使用5BV的去离子水清洗。 

3.4 平衡 

使用适当的5-10倍柱体积缓冲液进行柱子的平衡,至流出液电导和PH不变(与平衡液一致),缓冲液 如 Buffer A,如 20 mM PBS, pH7.0,具体的缓冲体系应根据目标蛋白的稳定性和等电点、离子交换介质的种类进行筛选和优化。 

3.5上样 

固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或膜过滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算,上样前确保样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。 

3.6洗脱 

上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线稳定,可以根据实际情况采取提高盐浓度或改变流动相 pH 的方法依次洗脱吸附于层析介质上的样品。 

3.7再生 

每次层析之后可用0.5-2 M NaCl 清洗层析柱,除去强结合于层析介质上的蛋白。 

3.8 在位清洗 

为了保持层析柱的性能,若有蛋白质或其他杂质在再生过程中未能有效去除,可执行在位清洗步骤,在位清洗时,也可采用反向冲洗的方法,具体操作步骤如下: 

(1)对于通过离子键结合过强的蛋白,可用3BV以上的2M NaCl 清洗,并用3BV以上的去离子水清洗; 

(2)对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂蛋白,可用0.2~0.5 M NaOH 清洗(与层析介质接触时间 1~2 h),并用5BV以上平衡液和3BV以上的去离子水清洗; 

(3)对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质,可用5BV以上的50%乙醇或 30%异丙醇 清洗(与层析介质接触时间0.5-1 h),并用 5 BV 以上的去离子水清洗。也可用含非离子表面活性剂的碱性或酸性溶液清洗,如0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M乙酸清洗 1-2 h,并用5BV以上的50%乙醇冲洗去除去污剂,然后用5BV以上的纯水冲洗(使用高浓度的有机溶剂时,为了避免产生气泡,应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法)。

3.9 应用案列

Seplife® LXPM SP5504M 应用(某客户生产纯化重组蛋白料液)

图1.Seplife® LXPM SP5504M 纯化重组蛋白色谱图

图2.Seplife® LXPM SP5504M 纯化重组蛋白收集组分SDS-PAGE图

4.存储

暂时不使用的层析介质需保存在 4~30℃ 的 20%乙醇中,已经装好的层析柱应保存在含 20%乙醇的缓冲液(pH 7.0);使用前请装柱后将乙醇清洗干净。

5.运输

运输中避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。


产品牌号

货号

包装规格

Seplife® LXPM SP5504M

PM50124M1-1

25ml

PM50124M1-2

100ml

PM50124M1-3

500ml

PM50124M1-4

1L

PM50124M1-5

5L

PM50124M1-6

10L

生产日期:见标签

使用期限:在适当的贮藏条件下可贮藏5年

注册人名称/生产企业:西安蓝晓科技新材料股份有限公司

注册人住址/生产地址:西安市高新开发区锦业路135号蓝晓科技园

售后服务单位:西安蓝晓科技新材料股份有限公司

邮政编码:710076

联系电话:86-29-8110 4050

传真:029-8669 1600-8254

官方网站:www.sunresin.com

注册人名称/销售企业:苏州蓝晓生物科技有限公司

注册人地址/销售地址:苏州市区工业园区裕新路108号5楼525室

联系电话:0512-65160522


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