Butyl-S Seplife FF层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型疏水层析介质,它是将硫丁基键合在6%琼脂糖凝胶上,利用疏水相互作用实现目标产物的纯化分离,非特异性吸附低,可以在较低的盐浓度结合和洗脱相对较强的疏水分子,常用于重组乙肝疫苗的纯化。
产品牌号 | Butyl-S Seplife FF |
外观 | 白色球状凝胶 |
基质 | Seplife 6FF |
配基 | 硫丁基 |
形状 | 球形 |
耐压流速(cm/h)* | 250-400 cm/h(在0.1Mpa) |
粒径(μm) | 45~165 |
蛋白吸附量 | ﹥26mg(HSA)/ml |
工作温度 | 4~40℃ |
pH稳定性 | 3~13(长期),2~14(短期在位清洗[CIP]) |
化学稳定性 | 在以下液体中稳定:所有常用的水相缓冲液, 1mol/L 氢氧化钠;70%乙醇;50%乙二醇;8M尿素;6mol/L盐酸胍;1mM HCl |
耐热性 | 121℃,0.1M NaCl溶液30min |
应用 | 乙肝疫苗纯化分离 |
*检测条件:层析柱16mm×300mm;*柱床高15cm;温度25℃;流动相为0.1mol/L NaCl。
使用方法
3.1 装柱
装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度,凝胶装柱前需要脱气。
3.2平衡
使用2~5倍柱床体积的平衡缓冲溶液平衡柱子,直至流出液的电导和pH同上样缓冲液的电导和pH完全一致。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液,如0.02~0.05mol/L的PBS中加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3.3上样
(1)样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心和过滤以后上样。
(2)一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目标产物。
(3)介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强,介质对组分吸附牢。
3.4洗脱
采用降低盐浓度使吸附的生物分子被洗脱下来。添加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱,最常用的是低盐浓度缓冲液,如0.02~0.05 mol/L的PBS。
3.5 再生
一般先用低盐浓度的缓冲溶液洗10倍以上的柱床体积,然后用结合蛋白的平衡液洗到平衡即可。若有失活蛋白质或脂类物质洗不掉,可用在位清洗除去。
3.6在位清洗
(1)对于以离子键结合上去的蛋白,可用0.5~1倍柱床体积的2M NaCl去除。
(2)对于沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白或脂类,可以先用1倍柱床体积的0.1M NaOH冲洗,再用平衡缓冲溶液清洗直至pH呈中性。
(3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱床体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,需注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
3.7存储
Butyl-S Seplife FF密封保存在4~30℃(保存溶液为20%乙醇+0.1M醋酸钠溶液)干燥、通风、清洁处,不可冷冻;用过的柱子保存在4~8℃,20%乙醇溶液中。
3.8运输
运输中避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。
注意事项
(1)采用1/5层析柱的总结合载量,可在梯度洗脱时得到优化的分离。
(2)样品与Butyl-S Seplife FF必须用洗脱缓冲液彻底平衡后,才能进行柱层析。
(3)在疏水层析中,疏水介质和疏水配基对选择性影响非常大,以下因素的影响也不可忽视:样品溶解度、纯化规模等。
(4)所装的柱床必须表面平整,无沟流及气泡,否则应重装。
(5)若是大规模纯化和捕获蛋白,采用非连续(间隔式)浓度变化洗脱,可以减少分离时间和缓冲液用量。
(6)洗脱过程中应严格控制流速,且勿过快。
(7)加样及整个洗脱过程中,严防柱面变干。
产品牌号 | 货号 | 包装规格 |
Butyl-S Seplife FF | A3043102 | 25ml |
A3043103 | 100ml | |
A3043104 | 500ml | |
A3043105 | 1L | |
A3043106 | 5L | |
A3043107 | 10L |
生产日期:见标签
使用期限:在适当的贮藏条件下可贮藏5年
注册人名称/生产企业:西安蓝晓科技新材料股份有限公司
注册人住址/生产地址:西安市高新开发区锦业路135号蓝晓科技园
售后服务单位:西安蓝晓科技新材料股份有限公司
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注册人名称/销售企业:苏州蓝晓生物科技有限公司
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