浙江层析填料哪个品牌好

His-Tag融合蛋白纯化常见问题：1.His标签蛋白不和介质结合。a可能原因：超声功率不合适（太大，蛋白碳化，太小，蛋白没完全释放)。解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。b.样品或缓冲液不合适。解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。c.His标签暴露不完全。解决方法：在缓冲液中加变性剂（4-8M尿素，4-6M盐酸胍），然后用IMAC介质纯化。d.His标签丢失。

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1987年Hochulietal.发现带有相连组氨酸的多肽和Ni2+-NTA介质作用力更强于普通的肽，1988年他第1次用这样的方法纯化了带六个组氨酸标签的多肽，无论是在天然还是变性条件下一次亲和纯化都得到很好效果，此后表达带六个组氨酸标签的蛋白配合IMAC变得非常普遍，相对而言，不带标签的蛋白纯化就非常困难，所以表达带六个组氨酸标签的蛋白配合IMAC纯化变成最常用而且最有效的研究蛋白结构和功能的有力手段。

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Ni Seplife FF(TED)——耐受性好，可以耐受100mM EDTA，非常适合真核外泌蛋白的纯化。可直接使用NaOH在位清洗，无需脱镍挂镍，省时省力。含有8M尿素及6M盐酸胍的样品用此镍层析填料影响结合，低丰度的样品结合效率效率差。

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金属螯合亲和层析介质：组氨酸（His）的残基上带有一个咪唑基团，可以和Ni2+,Co2+等过渡金属离子形成配位键而选择性的结合在金属离子上，这些金属离子能够用螯合配体固定在层析介质上，因此带有组氨酸标签的蛋白在经过装配了金属离子的层析介质时可以选择性的结合在介质上，而其他的杂质蛋白则不能结合或者仅能微弱结合。结合在介质上的HIS标签蛋白可以通过提高缓冲液中的咪唑浓度进行竞争性洗脱，从而得到较高纯度的HIS标签蛋白。