陕西蛋白纯化厂家供应

反压大，流速慢：凝胶过滤层析柱的装填应控制在60-100cm，太低影响分离度，太高反压增大。另外层析填料的清洁程度及样品的粘度，pH，离子强度也会影响液流速度。Protein A是金黄色葡萄球菌表面的蛋白，分子量42kDa，有5个不同的结构域可以结合IgG的Fc片段，具有很强的特异性亲和力，每个Protein A分子至少可以结合两个IgG分子。随着技术的发展，重组Protein A在不断的改进，目前用于单抗捕获的rProtein A多点和琼脂糖微球等层析填料基质偶联，减少了使用过程中配基脱落，同时为满足生物制药工艺消毒的要求，可以耐受0.1-0.5M氢氧化钠的处理。

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亲和层析捕获后，进一步用强阳离子交换层析SP Seplife Large Scale层析介质继续纯化捕获的单抗，进一步去除少量的HCP,HCD及第1步亲和层析捕获时rProtein A亲和介质脱离的亲和配基rProtein A。强阳离子交换层析后，通过调pH的方式用pH3.7-3.8的环境进行病毒灭活。低pH病毒灭活后，在通过阴离子交换层析Q Seplife Large Scale流穿模式，让单抗流穿，层析介质吸附痕量的杂质进一步纯化。

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预活化介质：环氧活化层析介质是将环氧基团键合在琼脂糖FF上形成的一种活性中间体，可直接偶联配基制备各类分离介质，用于生物大分子纯化分离。溴化氢活化琼脂糖层析介质是一种活化后的中间体，通过溴化氢和琼脂糖上面的羟基反应生成活化的氰酸酯基团。蛋白质，多肽，氨基酸等可以偶联到溴化氢活化4B/6B琼脂糖介质上，应用较为广泛。

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1、样品中含有8M尿素（6M盐酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED结合力弱，在含有高浓度尿素时结合效率差，所以含有变性剂的样品首选IMAC的镍柱。2、含有Cys/Try残基蛋白——含有Cys/Try 残基的蛋白和镍层析填料的结合力弱，此时可以选择IMAC Seplife FF(IAD)的填料螯合Cu离子进行亲和纯化（如乌司他丁可用此填料纯化）