南京Seplife® LXPM Phenyl 5504M

疏水层析是利用生物分子表面的疏水性能差异实现分离。在高盐条件下生物分子吸附在疏水层析介质的疏水基团上，降低盐浓度时，不同蛋白按疏水性从弱到强依次被洗脱，从而达到分离纯化的目的。疏水层析操作条件温和、分辨率高，是生物大分子分离纯化常用的方法之一。

Seplife® LXPM Phenyl 5504M层析介质是以聚丙烯酸酯为基质，在表面进行了亲水性改性再键合苯基疏水基团，具有载量高、分辨率高，良好的生物相容性和物理化学稳定性。与传统层析填料相比，显著提高了下游纯化工艺的生产效率，广泛应用于抗体、蛋白质、多肽、核酸等大分子的捕获、中度纯化、精细纯化等纯化阶段。

使用方法

3.1 装柱

匀浆浓度等于静置胶体积除以除以匀浆后的总体积。采用0.5M NaCl匀浆可获得最佳装柱效果，其浓度为60%-70%。方法如下：

1)色谱柱的柱体积 V，V=Ac×L，Ac=π×r2。

Ac：色谱柱横截面积；L:色谱柱高度；r：色谱柱半径。

2) 搅动介质形成匀浆液，量取所需质量或体积。其为柱体积的1.2倍左右，防止收缩。

3）用 0.5 M NaCl 溶液置换20%乙醇，平衡过夜。

4）装柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液调整匀浆浓度为 65 ~ 70%；将匀浆一次性倒入层析柱，沉降平衡后标注高度。

5）将分配器装入，调节高度使得压缩系数为 1.05 ~ 1.10；然后启动输液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床稳定。

6）按照 SOP 进行柱效和对称性的测定，须达到预定标准。 

3.2 柱效评价 

装好之后，色谱柱用3-5体积超纯水清洗。100cm/h流速平衡并进行柱效测试。

离子交换层析柱的柱效测试方法

样品：      2 M NaCl 溶液 

上样量：    1~5 % 柱体积 

洗脱液：    0.5 M NaCl 溶液 

线性流速：  100 cm/h 

检测：      UV @ 280 nm ,2 M NaCl 上样：电导检测仪

3.3 清洗 

装好的色谱柱应使用至少使用5BV的去离子水清洗。 

3.4 平衡 

使用适当的5-10倍柱体积缓冲液进行柱子的平衡，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致），如：20 mM PBS + 0.5 M NaCl, pH 7.0 平衡。 

3.5上样 

固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用 平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或膜过滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算，上样前确保样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。 

3.6洗脱 

上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线稳定，可以根据实际情况采取降低盐浓度或改变流动相 pH 的方法依次洗脱吸附于层析介质上的样品。 

3.7再生 

每次层析之后可用 3~5 BV 低离子强度的缓冲液流速再生层析柱，除去疏水结合较强（可

逆结合）的蛋白，然后用 5 BV 的去离子水清洗，最后 5 BV 平衡缓冲液平衡层析柱。

3.8 在位清洗 

为了保持层析柱的性能，若有蛋白质或其他杂质在再生过程中未能有效去除，可执行在位清洗步骤，在位清洗时，也可采用反向冲洗的方法，具体操作步骤如下： 

（1）对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂蛋白，可用 0.2~0.5 M NaOH 清洗（与层析介质接触时间 1 ~ 2 小时），并用 5 BV 以上平衡液和 3 BV 以上的去离子水清洗；

（2）对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用 5 BV 以上的 50%乙醇或 30%异丙醇清洗（与层析介质接触时间 0.5~1 小时），并用 5 BV 以上的去离子水清洗。也可以用含非离子表面活性剂的碱性或酸性溶液清洗，如用 0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M 乙酸清洗 1 ~2 小时，并用 5 BV 以上的 50%乙醇冲洗去除去污剂，然后用 5 BV 以上的纯水冲洗（使用高浓度的有机溶剂时，为了避免产生气泡，应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法）。

3.9 应用案例

（1）5ml  Seplife® LXPM Phenyl 5504M预装柱

（2）样品：核糖核酸酶和溶菌酶混样

（3）波长：280nm，流速：3ml/min

（4）洗脱：缓冲液A1：20mM PB+1.5M 硫酸铵，pH7.0

缓冲液B1：20mM PB，pH7.0

（5）洗柱溶液：1 M NaOH溶液 超纯水

图1 Seplife® LXPM Phenyl5504M纯化蛋白图谱

备注：红色曲线：Seplife® LXPM Phenyl5504M

蓝色曲线：某外样

4.存储

暂时不使用的层析介质需保存在 4～30℃ 的 20%乙醇中，已经装好的层析柱应保存在含 20%乙醇的缓冲液(pH 7.0)；使用前请装柱后将乙醇清洗干净。

5.运输

运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

生产日期：见标签

使用期限：在适当的贮藏条件下可贮藏5年

注册人名称/生产企业：西安蓝晓科技新材料股份有限公司

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售后服务单位：西安蓝晓科技新材料股份有限公司

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