Seplife® LXPM-Ni5504 IDA C层析介质是以聚丙烯酸酯为基质，在表面进行了亲水性改性再偶联螯合基团制成，具有亲水性好、高载量、分辨率高、非特性吸附小，物理化学稳定等特点。Seplife® LXPM-Ni5504 IDA广泛应用于分离纯化能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His 标签的重组蛋白。
性能介绍
骨架 | 聚甲基丙烯酸甲酯 |
外观 | 淡蓝色不透明球状颗粒 |
功能基团 | Ni2+ |
D50v粒度（μm） | 200 |
孔径（Å） | 1000 |
载量（mg/ml介质） | ≧18mg His蛋白 |
离子结合量（Ni2+ umol/ml） | ~55 |
耐压流速(cm/h） | 800-1000 22mm×20cm,3bar 压缩因子≦1.05 |
最大耐压（MPa） | 0.5 |
pH稳定范围 | 2-13 |
存储，防腐剂 | 20%乙醇溶液，150mol/l NaCl |
稳定性 | 在常用水相溶液中稳定：0.1M氢氧化钠；8M尿素(24h)；6M盐酸胍(24h)，1M NaOH(24h)，5mM DTT(24h) |
使用方法
3.1 装柱
匀浆浓度等于静置胶体积除以除以匀浆后的总体积。采用0.5M NaCl匀浆可获得最佳装柱效果，其浓度为60%-70%。方法如下：
1)色谱柱的柱体积 V，V=Ac×L，Ac=π×r2。
Ac：色谱柱横截面积；L:色谱柱高度；r：色谱柱半径。
2) 搅动介质形成匀浆液，量取所需质量或体积。其为柱体积的1.2倍左右，防止收缩。
3）用 0.5 M NaCl 溶液置换20%乙醇，平衡过夜。
4）装柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液调整匀浆浓度为 65 ~ 70%；将匀浆一次性倒入层析柱，沉降平衡后标注高度。
5）将分配器装入，调节高度使得压缩系数为 1.05 ~ 1.10；然后启动输液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床稳定。
6）按照 SOP 进行柱效和对称性的测定，须达到预定标准。
3.2 柱效评价
装好之后，色谱柱用3-5体积超纯水清洗。100cm/h流速平衡并进行柱效测试。
离子交换层析柱的柱效测试方法
样品： 2 M NaCl 溶液
上样量： 1~5 % 柱体积
洗脱液： 0.5 M NaCl 溶液
线性流速： 100 cm/h
检测： UV @ 280 nm，2 M NaCl 上样：电导检测仪
3.3 清洗
装好的色谱柱应使用至少使用5BV的去离子水清洗。
3.4 平衡
使用适当的5-10倍柱体积缓冲液进行柱子的平衡，至流出液电导和PH不变（与平衡液一致），具体的缓冲体系应根据目标蛋白特性及稳定性进行筛选和优化。
3.5上样
固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或膜过滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算，上样前确保样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。此外，还需注意以下事项：
（1）样品一般溶解于pH6～8的初始缓冲液中，提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。
（2）缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐，同时最好避免巯基乙醇、DTT等还原剂。
（3）常用缓冲液有10～100mmol/L磷酸钠缓冲液、20～200mmol/L Tris-HCl缓冲液等。
（4）缓冲液中一般要加入0.15～0.5mol/L的NaCl以消除离子交换作用。
3.6洗脱
上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线稳定，可以根据实际情况采取以下几种方法洗脱吸附于层析介质上的样品：
（1）降低pH洗脱：大多数蛋白在pH 4~6会被洗脱下来（也可以在pH 3~4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
（2）竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度（如0~0.5mol/L咪唑、0~50 mmol/L组氨酸、0~2mol/L NH4Cl）。
（3）螯合剂洗脱：EDTA、EGTA 等螯合剂可同金属离子产生作用力会使蛋白被洗脱下来。但是此法不能分离不同的蛋白，会影响蛋白的吸附，导致融合蛋白无法挂柱。
备注：（1）初次使用时，如不确定洗脱需要的咪唑浓度，推荐在初始缓冲液中分别加入10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/L咪唑，浓度从低到高分别洗脱和收集重组蛋白，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。
（3）降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使金属离子脱落，下次使用前需重新螯和金属离子。
（4）有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。
上述洗脱方法，均须在缓冲液中加入150~500mmol/L的NaCl以消除离子交换作用。
3.7再生
（1）多次使用后或需要更换螯合的金属离子时，必须将凝胶脱镍再生。脱镍方法：首先用5~10个柱床体积的蒸馏水淋洗柱子，然后用5~10个柱床体积的100mmol/L EDTA淋洗柱子，最后用2~3个柱床体积的0.5mol/L NaCl洗掉残留的EDTA。
（2）多次使用的柱子脱镍后一般需要清洗。清洗方法：用0.1~1.0 mol/L NaOH反向清洗柱子，50 cm/h保持1~2 h，不仅可以去除结合强的杂质，也可以去除热源。
（3）清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法：首先用2~5个柱床体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子，然后用0.1~0.3mol/L金属盐溶液过柱5~10个柱床体积以螯合金属离子，最后用5~10个柱床体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。
3.8 在位清洗
为了保持层析柱的性能，若有蛋白质或其他杂质在再生过程中未能有效去除，可执行在位清洗步骤，具体操作步骤如下：
（1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：用2mol/L NaCl溶液反向清洗2~3个柱床体积。
（2）去除强疏水性蛋白和脂质等：用70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗4个柱床体积。
（3）除去沉淀蛋白、疏水性蛋白：参照凝胶再生步骤。
4.存储
暂时不使用的层析介质需保存在 4~30 ℃ 的 20%乙醇中，已经装好的层析柱应保存在含 20%乙醇的缓冲液(pH 7.0)；使用前请装柱后将乙醇清洗干净。
5.运输
运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
产品牌号 | 货号 | 包装规格 |
Seplife® LXPM-Ni5504 IDA C | PM521024C1-1 | 25ml |
PM521024C1-2 | 100ml | |
PM521024C1-3 | 500ml | |
PM521024C1-4 | 1L | |
PM521024C1-5 | 5L | |
PM521024C1-6 | 10L |
生产日期：见标签
使用期限：在适当的贮藏条件下可贮藏5年
注册人名称/生产企业：西安蓝晓科技新材料股份有限公司
注册人住址/生产地址：西安市高新开发区锦业路135号蓝晓科技园
售后服务单位：西安蓝晓科技新材料股份有限公司
邮政编码：710076
联系电话：86-29-8110 4050
传真：029-8669 1600-8254
官方网站：www.sunresin.com
注册人名称/销售企业：苏州蓝晓生物科技有限公司
注册人地址/销售地址：苏州市区工业园区裕新路108号5楼525室
联系电话：0512-65160522
苏州市工业园区裕新路108号
0512-65160522
seplife@sunresin.com
 |  |
| 官网二维码 | 微信公众号 |
