江苏seplife 4FF

Seplife 4FF高流速琼脂糖层析介质是在Seplife 4B琼脂糖层析介质基础上经过交联形成的，其化学稳定性及物理性能显著增强，具有高流速、高载量、非特异性吸附低、回收率高、可多次重复使用等特点，可用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶过滤层析纯化。

＊检测条件：层析柱16mm×300mm；＊柱床高10cm；温度25℃；流动相为0.1mol/L NaCl。

使用方法

3.1 装柱

装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。

3.2平衡

使用2~5倍柱床体积的上样平衡液平衡柱子，务必使流出液的电导和pH同上样缓冲液的电导和pH完全一致。

3.3上样

（1）样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。

（2）介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

（3）上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离效果越好。

3.4洗脱

用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

3.5再生

一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。一些失活蛋白或者脂类在再生时洗不下来，可用在位清洗（CIP）去除。

3.6在位清洗

（1）对于以离子键结合的蛋白，可以用0.5~1倍柱床体积的2M NaCl去除。

（2）对于沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白或脂类，可用1倍柱床体积的0.1M NaOH 去除。

（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，可用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清。

（4）有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后需用至少3倍柱床体积的平衡缓冲溶液平衡柱子，直至pH和电导保持不变。

3.7存储

密封贮存在4~30℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方，不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃，20%乙醇溶液中。

3.8运输

运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

4.注意事项

（1）使用凝胶过滤前应尽可能将样品体积浓缩。

（2）样品必须澄清没有颗粒。

（3）为了得到最高的分辨率，上样体积不能超过柱床体积的5%。

（4）样品与层析介质必须用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。 

（5）所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。

（6）为了保护蛋白的稳定性和活性，需选择一种缓冲液纯化蛋白。

（7）为了避免蛋白和介质之间非特异性的离子相互作用，缓冲液中最高可加入0.15mol/L NaCl。

（8）依据目标蛋白的分子量，选择介质分离范围中值最接近的那种介质。

（9）洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

（10）加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。

（11）本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。  

生产日期：见标签

使用期限：在适当的贮藏条件下可贮藏5年

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