济南Plasmid Seplife LX

Plasmid Seplife LX亲和层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型高度交联的亲硫芳香族琼脂糖层析介质，用于纯化超螺旋DNA，广泛应用于基因治疗和DNA疫苗的开发应用。该层析介质具有高流速、低反压、非特异性吸附低、良好的亲水性、化学稳定性和机械性特点，方便进行规模放大，可缩短生产时间，提高生产效率。

使用方法

3.1 装柱

装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。

3.2平衡

使用2~5倍柱床体积的上样平衡液平衡柱子，务必使流出液的电导和pH同上样缓冲液的电导和pH完全一致。平衡液是含高浓度硫酸铵的Tris缓冲溶液，推荐缓冲液：2 M（NH4）2SO4，10mM EDTA，100mM Tris-HCl，pH 7.5 。

3.3上样

（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。

（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

3.4洗脱

常用低浓度的硫酸铵溶液（1.7M）加0.3M氯化钠溶液洗脱。

推荐洗脱液：100mM Tris-HCl，1.7 M （NH4）2SO4，10 mM EDTA, pH 7.5 + 0.3 M NaCl。

3.5再生

 一般可用100 mM Tris, 10 mM EDTA洗脱5倍以上柱体积，然后用结合蛋白时的平衡液洗到平衡即可。

3.6在位清洗

（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床体积的2M NaCl去除。

（2）对于沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白或脂类，一般先用1mol/L NaOH洗脱5倍以上柱体积，然后用结合蛋白时的平衡液洗到平衡即可。

（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱床体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，需注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

3.7存储

密封保存在4~30℃（保存溶液为20%乙醇）干燥、通风、清洁处，不可冷冻；用过的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8运输

运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

注意事项

（1）柱的选择：从理论上说，只要柱足够长，就可以获得理想的分辨率，但由于层析柱流速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢，峰变宽，分辨率降低；柱的直径增加，使液体流动的不均匀性增加，分辨率明显下降。 

（2）纯化过程样品与层析介质必须用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。 

（3）所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。

（4）洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

（5）加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。

生产日期：见标签

使用期限：在适当的贮藏条件下可贮藏5年

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