吴忠Seplife LX-MC-Dex1

Seplife LX-MC-Dex1是蓝晓科技自主研发的一种适用于细胞贴附生长的微珠载体，它以Seplife G50为基质，表面覆盖带正电荷的DEAE基团。Seplife LX-MC-Dex1是当前用途最广的一种微载体，适应培养的细胞类型60余种，主要用于生产疫苗、蛋白质产品等。

 * 生理盐水中

使用方法

3.1微载体预处理

首先，干燥的微载体在无Ca2+ 和Mg 2+ 的磷酸缓冲液（PBS，pH=7.4）（每克微载体加50-100ml）中在室温下浸泡膨胀至少3小时。然后，弃去上清液，用新配制的无Ca2+ 、Mg 2+ 的PBS（pH=7.4）（每克微载体加30-50ml）洗涤微载体数分钟。接着，弃去PBS，换上新的无Ca2+ 、Mg2+ 的PBS（pH=7.4）（每克微载体加30-50ml）。之后，微载体溶液用高压灭菌法灭菌（115℃，15min，15psi）。 微载体LX-MC-dex1非常稳定，可以反复（至少5次）长时间（130°C，12h，27psi）进行高压灭菌而不影响其性能。灭菌结束后使用前，加入培养基润洗置换（20-50ml/g），之后加入10%血清放置过夜。

3.2微载体培养

准备好消化好的细胞，连同之前准备好的微载体一起加入方瓶或反应器中（微载体加量1-5g/L），在一定条件下开始培养，4小时后观察细胞贴附情况。如果细胞贴附良好，继续跟踪培养，观察细胞生长情况。

3.3微载体培养操作要点

（1）培养初期：保证培养基与微球体处于稳定的pH与温度水平，接种细胞（对数生长期，而非稳定期）至终体积1/3的培养液中，以增加细胞与微载体接触的机会。常使用2-3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。

由于动物细胞无细胞壁，对剪切力敏感，因而无法靠提高搅拌转速来增加接触概率。通常的操作方式是：在贴壁期采用低搅拌转速，时搅时停；数小时后，待细胞附着于微载体表面时，维持设定的低转速，进入培养阶段。微载体培养的搅拌非常慢，最大速度75r/min。

（2）贴壁阶段（3-8d）后，缓慢加入培养液至工作体积，并且增加搅拌速度保证完全均质混合。

（3）培养维持期：进行细胞计数（胞核计数）、葡萄糖测定及细胞形态镜检。随着细胞增殖，微球变得越来越重，需增加搅拌速率。经过3d左右，培养液开始呈酸性，需换液。具体方法：停止搅拌，让微珠沉淀5min，弃掉适宜体积的培养液，缓慢加入新鲜培养液（37℃），重新开始搅拌。

（4）收获细胞：首先，排干培养液，至少用缓冲液漂洗1遍；然后，加入相应的酶，快速搅拌（75-125r/min）20-30min；最后，解离收集细胞及其产品。

（5）微载体培养的放大：可以通过增加微载体的含量或培养体积进行放大。使用异倍体或原代细胞培养生产疫苗、干扰素，已被放大至4000L以上。

存储

贮存于4~30℃、干燥、通风、清洁处。

运输

运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

注意事项

本产品避免与氧化剂接触。

生产日期：见标签

使用期限：在适当的贮藏条件下可贮藏5年

注册人名称/生产企业：西安蓝晓科技新材料股份有限公司

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